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細(xì)胞RNAi技術(shù)

產(chǎn)品描述
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RNAi技術(shù)服務(wù)

近年來的研究表明,將與mRNA同源的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞,可以使mRNA發(fā)生特異性的降解,從而抑制其相應(yīng)基因的表達(dá)。這種轉(zhuǎn)錄后基因沉默機(jī)制(Post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾(RNAi)。由于RNAi具有高度的序列專一性,可以特異地使特定基因沉默,獲得功能喪失或降低突變,因此RNAi可以作為一種強(qiáng)有力的研究工具,用于功能基因組的研究。

科佰生物應(yīng)用國外知名公司的RNAi Designer平臺,可對靶基因序列進(jìn)行干擾位置效應(yīng)評價和序列同源型分析,完成siRNA/miRNA多種序列的的設(shè)計,并提供從siRNA合成、RNAi載體構(gòu)建到RNAi功能驗(yàn)證等全面的RNAi解決方案。

siRNA合成服務(wù)

對于瞬時基因沉默實(shí)驗(yàn),化學(xué)合成siRNA的方法操作簡便,容易獲得高水平的瞬時沉默效果,特異性強(qiáng)。我們通過嚴(yán)格設(shè)計來增強(qiáng)siRNA的專一性;針對某靶基因設(shè)計的3條siRNA可保證其中兩條的Knockdown效率達(dá)到75%(在轉(zhuǎn)染效率大于80%的情況下)。

在RNAi效應(yīng)階段,siRNA雙鏈結(jié)合一個核酶復(fù)合物從而形成所謂RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。激活的RISC通過堿基配對定位到同源mRNA轉(zhuǎn)錄本上,并在距離siRNA 3’端12個堿基的位置切割mRNA。

siRNA合成實(shí)驗(yàn)流程

1)根據(jù)序列信息,進(jìn)行化學(xué)合成;
2)純化及定量;
3)凍干處理;
4)細(xì)胞轉(zhuǎn)染預(yù)實(shí)驗(yàn),優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件;
5)瞬時轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染;
6)RT-PCR或Western blot檢測轉(zhuǎn)染后某一時間點(diǎn)靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化。

質(zhì)量保證

針對某靶基因設(shè)計的3條siRNA可保證其中2條的Knockdown效率達(dá)到75%(在轉(zhuǎn)染效率大于80%的情況下)。

shRNA構(gòu)建服務(wù)

構(gòu)建shRNA表達(dá)載體,實(shí)現(xiàn)shRNA在細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá),能夠彌補(bǔ)瞬時轉(zhuǎn)染持續(xù)時間短的不足。

shRNA構(gòu)建實(shí)驗(yàn)流程

1)mRNA序列分析;
2)引物設(shè)計及合成;
3)單鏈互補(bǔ)引物退火;
4)將片段克隆至載體;
5)測序以確保插入序列正確性;
6)細(xì)胞轉(zhuǎn)染預(yù)實(shí)驗(yàn),優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件;
7)瞬時轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染;
8)RT-PCR或Western blot檢測轉(zhuǎn)染后某一時間點(diǎn)靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化。

質(zhì)量保證

針對某靶基因設(shè)計的3條shRNA序列,在轉(zhuǎn)染效率>80%的前提下,我們保證至少有1個克隆可以達(dá)到70%轉(zhuǎn)錄水平的沉默效率。

miRNA構(gòu)建服務(wù)

RNAi載體利用細(xì)胞內(nèi)源性的miRNA加工機(jī)制,相比傳統(tǒng)shRNA載體可更高效地表達(dá)RNA發(fā)夾結(jié)構(gòu),并具有采用GFP進(jìn)行表達(dá)追蹤的優(yōu)點(diǎn)。每個基因設(shè)計的4條序列我們保證至少有2條可以達(dá)到至少70%轉(zhuǎn)錄水平的Knockdown效率(在轉(zhuǎn)染效率大于80%的情況下)。

miRNA構(gòu)建實(shí)驗(yàn)流程

1)針對特定基因,設(shè)計miR RNAi序列,合成該序列并退火生成雙鏈DNA;
2)將DNA與載體連接并轉(zhuǎn)化;
3)測序驗(yàn)證miRNA序列的正確性;
4)細(xì)胞轉(zhuǎn)染預(yù)實(shí)驗(yàn),優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件;
5)瞬時轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染;
6)RT-PCR或Western blot檢測轉(zhuǎn)染后某一時間點(diǎn)靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化。

質(zhì)量保證

針對某靶基因設(shè)計的3條miRNA序列,在轉(zhuǎn)染效率>80%的前提下,我們保證至少有1個克隆可以達(dá)到70%轉(zhuǎn)錄水平的沉默效率。

客戶提供

1)目的基因的Accession Number(Human、Mouse或Rat種屬)以及技術(shù)要求(包括OD和nmols的精確數(shù)量、純化類型和修飾要求等);

2)細(xì)胞株和詳細(xì)的細(xì)胞培養(yǎng)的操作步驟;

3)一抗(如果需要Western blot檢測)。

 

服務(wù)說明

1. RNAi技術(shù)服務(wù)不包括基因功能檢測,如需檢測,需要另外評估和收費(fèi);
2. 客戶可以提供實(shí)驗(yàn)原材料,也可以查找本公司模板庫、載體庫、細(xì)胞庫,也可以由我們公司代購;

如果您有意訂購,請聯(lián)系我們

聯(lián)系方式:4008-750-250

手機(jī):180-6607-1954

郵箱:sales@cobioer.com

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